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Anticorps témoins anti-isotypes

Un témoin dirigé contre un isotype est un témoin négatif qui révèle la quantité de bruit de fond dû à l'anticorps primaire. Un témoin dirigé contre un isotype pourrait être soit un anticorps anti-myélome de spécificité non connue, soit un anticorps dirigé contre un antigène présumé non présent dans les cellules étudiées.

Idéalement, le témoin dirigé contre un isotype doit être apparié au niveau de l'espèce, de la chaîne lourde (IgA, IgG, IgD, IgE, ou IgM), de la sous-classe et de la classe de chaîne légère (kappa, lambda) de l'anticorps primaire. Si l'on utilise un anticorps primaire marqué directement, il est important de sélectionner un témoin anti-isotope conjugué au même fluorochrome ou marqueur que l'anticorps du test. L'utilisation d'un fluorochrome possédant un spectre semblable ne suffit pas.

Pourquoi utiliser des témoins anti-isotype?

Les témoins anti-isotype révèlent la quantité de liaison non spécifique aux tissus ou aux cellules à l'étude. Les anticorps produits chez la souris, comme par exemple les IgG2a, se lient très fortement à certains leucocytes humains quelle que soit la spécificité de l'anticorps du test. Dans ce cas, un témoin anti-isotype IgG2a de souris sera nécessaire avec des cellules ou des tissus d'origine humaine afin de pouvoir évaluer correctement les résultats expérimentaux.

Typiquement, les anticorps primaires se lient de manière non-spécifique pour les raisons suivantes:

  • Liaison non-spécifique des récepteurs Fc aux cellules
  • Interactions non-spécifique d'anticorps avec des protéines cellulaires
  • Autofluorescence des cellules

Les témoins anti-isotype sont typiquement utilisés comme témoins en cytométrie de flux (FACS). Un anticorps témoin anti-isotype peut être utilisé comme étalon, agent bloquant ou protéine de revêtement dans diverses applications scientifiques telles que: , , , , and .

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