ELISA Introduction

Introduction

Les tests immunoenzymatiques ELISAs (Enzyme Linked Immunosorbent Assays) sont parmi les tests protéomiques en aqua labo les plus communs utilisés aujourd'hui. Le test ELISA est né de la conception d'un test plus ancien, le Test Radio-Immunologique (RIA) .. Le RIA utilise des réactifs radioactifs, ce qui entraine un risque significatif pour la santé et la sécurité humaines s'ils sont manipulés incorrectement. Les premiers ELISAs ont été développés pour éviter ce danger et offrir une alternative rapide, simple, et sûre. Alors que les RIAs sont encore employés dans certains contextes, ils ont été en grande partie remplacés par l'ELISA plus sûr et moins complexes techniquement. Comme son prédécesseur, l'ELISA est une méthode à base d'anticorps conçue pour détecter quantitativement ou qualitativement un analyte spécifique dans un échantillon. Les analytes dosés par la méthode ELISA sont généralement (mais pas nécessairement) des protéines, et les types d'échantillons peuvent aller des matières biologiques fluides (par exemple. plasma, sérum, urine, perspirant) aux milieux de culture de cellules raffinés ou à la protéine recombinante purifiée en solution.

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Alors qu'il existe différents types de tests ELISA, le principe de base de l'analyse est d'une étonnante simplicité : les anticorps conjugués à une enzyme (le plus généralement une peroxydase) sont liés à un analyte immobilisé sur un support solide (généralement une plaque de microtitration de 96 puits). L'échantillon est lavé et tout anticorps non lié est rincé. Un substrat chromogène incolore est alors introduit et le conjugué enzymatique catalyse une réaction qui transforme le substrat incolore en un dérivé de couleur sombre. Le changement de la couleur est employé pour confirmer la présence de l'analyte dans une analyse qualitative ; pour une analyse quantitative le degré de décalage colorimétrique est comparé au décalage observé sur une gamme d'étalonnage connue et permet de déterminer la quantité d'analyte présent.

Representative image of an ELISA after the color change reaction takes place A typical completed ELISA

A 96-well microtiter plate serves as a solid support and provides a vessel to carry out the ELISA reaction. Enzyme conjugated to an antibody transforms a colorless chemical substrate into one with a dark color.

The degree to which the color has changed is used to determine the quantity of analyte in the sample.

ELISA est-il le test qu'il me faut ?

ELISA est reconnu pour être un test rapide, simple, et précis qui permet de détecter de manière quantitative et qualitative les analytes présents dans un échantillon. Certaines considérations sont à prendre en compte avant de décider si l'ELISA est le test qui convient pour le résultat recherché. Afin d'être de bons candidats au test ELISA, l'analyte et l'échantillon doivent satisfaire au moins aux critères de base suivants :

  • L'analyte doit pouvoir être reconnu par un anticorps.
  • •L'analyte doit être présent dans un échantillon aqueux de volume approprié. (Habituellement 50-200μL après dilution). .
  • L'échantillon ne doit contenir aucune substance qui interfère avec l'identification de l'antigène ou la détection colorimétrique.
  • •La quantité d'analyte dans l'échantillon doit être suffisamment significative pour permettre sa détection.
  • En plus de savoir quels types d'échantillons sont compatibles avec ELISA, il est également utile de savoir lesquels sont incompatibles avec le format ELISA. Les types d'échantillons ou les analytes peuvent être incompatibles avec le format ELISA pour différentes raisons techniques. Voici par exemple quelques critères pour lesquels un échantillon est incompatible avec ELISA :

  • L'échantillon contient des traces seulement d'analyte.
  • Les analytes pour lesquels la production d'anticorps n'est pas importante. (par exemple. de très petites molécules)
  • Les échantillons contiennent des détergents, des acides forts ou des bases fortes.
  • Les échantillons contiennent des pigments de couleur foncée qui peuvent colorer une plaque de microtitration ou support solide similaire.
  • REMARQUE::Si un test ELISA ne convient pas pour une raison technique ou autre, antibodies-online offre habituellement une solution différente. par exemple. pour les cibles à petites molécules difficiles ou impossibles à analyser par ELISA, nous pouvons proposer ...... . Si vous avez des difficultés à trouver les outils adéquats pour réaliser une expérience difficile, . If you're having trouble finding the right tools to carry out a difficult experiment, n'hésitez pas à demander conseil à l'un de nos scientifiques chargés de l'assistance technique..Il peut vous proposer une option que vous n'aviez peut-être pas considérée.

    L'ELISA a bon nombre d'avantages. C'est un test rapide, flexible, et spécifique ce qui fait de lui un outil puissant et indispensable dans la "boîte à outils" du chercheur. Les résultats obtenus peuvent être qualitatifs, semi-quantitatifs, ou entièrement quantitatifs (selon la conception de l'analyse effectuée). La technique ELISA est profondément ingénieuse dans sa simplicité ; une fois qu'un test est optimisé, un technicien rudimentairement formé peut habituellement analyser entre 100-200 échantillons par la méthode ELISA en quelques heures. Les étalons et les échantillons sont testés en double (au moins) faisant d'ELISA un test assez robuste et plus tolérant à l'erreur d'utilisateur ou à la variation stochastique d'échantillon que beaucoup d'autres méthodes.

    Cependant, ELISA a quelques limites. La nature fondamentale du test ELISA le limite à la détection d’une cible unique pour chaque test. Puisque le test dépend de la liaison de l'analyte par un anticorps, ELISA ne peut pas distinguer les analytes antigéniquement identiques (différentes cibles identifiées par le même anticorps). Par exemple le même test d'ELISA identifiera souvent plusieurs ou toutes les différentes isoformes de la même protéine dans un échantillon. Le test exige également un équipement spécialisé, notamment un lecteur spectrophotométrique de microplaques, pour conduire correctement le test. Le format ELISA est également le plus rentable lorsque beaucoup d'échantillons sont analysés. Un seul kit de 96 puits est généralement capable d'analyser 40 échantillons en double, aussi bien qu'une courbe d'étalonnage de 8 échantillons. Beaucoup de chercheurs trouvent le coût d'un kit d'ELISA prohibitif pour des études limitées à seulement une poignée d'échantillons.

    REMARQUE: Si vous devez analyser plusieurs cibles en une seule fois, vous pourriez être intéressé par notre large gamme de tests multiplex et séries d'anticorps. .

    Les inconvénients majeurs associés à ELISA ont été en grande partie atténués par les progrès technologiques. Aujourd'hui la plupart des institutions universitaires ou privées de recherche possèdent des lecteurs de plaques spécialisés et les équipements nécessaires pour réaliser les différentes étapes d'un test ELISA. De plus, la concurrence qui sévit sur le marché a réduit le prix des kits ELISA offrant généralement une meilleure valeur par échantillon analysé que beaucoup d'autres méthodes courantes en protéomique. Cependant, il faudrait néanmoins soigneusement étudier la conception de l'expérience et évaluer les avantages et les inconvénients du format ELISA par rapport à toutes les autres options avant de prendre la décision concernant les techniques à mettre en œuvre.

    Concevoir un test ou acheter un kit ?

    Une fois que vous avez décidé d'utiliser un ELISA, vous devez choisir entre un kit ELISA disponible dans le commerce, ou essayer de développer un test avec vos propres moyens à partir de rien. Il y a plusieurs raisons pour lesquelles on préfère de concevoir un test de novo plutôt que d'acheter une solution prête à l'emploi. Si vous avez besoin d'affiner votre analyse en dehors des spécifications du kit disponible dans le commerce, si vous devez bien contrôler la nature spécifique des composants utilisés dans votre analyse, ou si vous devez employer un anticorps spécifique ou produit sur commande, vous devrez considérer le temps et l'effort nécessaires à investir pour concevoir un test de novo.

    Note: Si vous devez développer un test de novo, antibodies-online vous propose des centaines de milliers de composants approuvés pour ELISA comme les anticorps, les protéines et les réactifs nécessaires.

    Cependant, si vous n'êtes pas contraints aux critères ci-dessus, vous pourriez considérer acheter un test disponible dans le commerce pour fins de simplification.

  • Gagner du temps : L'optimisation d’un test ELISA personnalisé prend beaucoup de temps. Même pour un scientifique expérimenté utilisant des réactifs compatibles, un nouveau test nécessite généralement des heures ou des jours d'optimisation avant qu'il soit opérationnel. Tout ce temps que vous pourriez employer à rassembler, analyser, interpréter et publier vos données. Considérez l'impact sur votre valeur temporelle, et le temps passé par les techniciens et étudiants à préparer et réaliser le test.

  • • Vous assurer de la compatibilité des réactifs : Un test prêt à l'emploi : est garanti pour contenir des réactifs qui sont compatibles entre eux. Lorsque vous élaborez votre propre test, même si vous choisissez des réactifs de qualité vous pouvez accidentellement trébucher sur des produits incompatibles (par exemple. deux anticorps qui reconnaissent un épitope semblable et se bloquent à cause de l’empêchement stérique).
  • Éviter les problèmes de contrôle de qualité frustrants : En élaborant un test à partir de zéro, vous aurez probablement à vous procurer des réactifs de plusieurs sources différentes. Après avoir passé tout le temps nécessaire à localiser la source de chacun des divers réactifs dont vous avez besoin, même un simple mauvais tampon pourrait ruiner votre test et vous aurez besoin ensuite d'encore plus de temps pour trouver l'origine du problème. En revanche, chez antibodies-online, chaque kit ELISA prêt à l'emploi est couvert par notre garantie satisfait ou remboursé . Dans le cas peu probable où vous rencontrez un problème, notre personnel technique se charge de le résoudre.

  • • Faire des économies : Alors qu'il est tentant d'essayer de mettre en œuvre votre propre ELISA pour gagner quelques dollars, la plupart des chercheurs constatent que l'analyse coût/bénéfices n'est pas finalement avantageuse. En tenant compte de tous les différents composants qui doivent être achetés pour produire un test de novo il est souvent tout aussi rentable d’acheter un kit prêt à l'emploi.