Lignes directrices de base relatives à l'expérimentation

Vous trouverez ci-dessous une liste de lignes directrices de base pour différents types d'expériences. Bien que cette liste ne soit pas exhaustive (aucune liste ne pourrait l'être car les méthodes et les techniques varient sensiblement selon la nature de votre expérience) nous vous suggérons fortement de consulter ces lignes directrices lors de la planification et la conduite de votre expérience.

Trousses de test ELISA et de dosage biochimique

  • Les trousses de test ELISA et de dosage biochimique sont généralement expédiées en unités autonomes monobloc englobant tous les réactifs nécessaires pour effectuer le test. En effectuant un test ELISA, utilisez SEULEMENT les réactifs qui sont inclus dans la trousse. Ne substituez aucun composant du kit et n'employez aucun réactif externe à moins que cette substitution soit spécifiquement indiquée ou approuvée selon le manuel de produit, par le fabricant ou par antibodies-online.
  • Aussi bien les étalons que les échantillons doivent être utilisés dans des analyses en double au moins afin d'atténuer le risque d'erreur d'utilisateur et/ou d’équipement.
  • TOUJOURS traiter en double l'ensemble complet des étalons inclus dans la trousse pour chaque test effectué.
  • Western blot

  • Un contrôle de chargement approprié est nécessaire chaque fois qu'un test Western blot est effectué. Quand un anticorps secondaire est utilisé pour le marquage, le même anticorps secondaire doit être utilisé pour marquer les échantillons et les contrôles de chargement. Antibodies-online propose une large gamme d'anticorps compatibles avec les chargements de contrôle couramment utilisés. Pour plus d'information, veuillez consulter l'un de nos scientifiques chargés de l'assistance technique.
  • Il est nécessaire de bloquer la membrane avant la coloration pour éviter des liaisons non spécifiques. Antibodies-online recommande l'utilisation d'une solution contenant 5% de lait en poudre écrémé et 2-3% BSA, ou des tampons de blocage communément disponibles homologués pour les tests western blot.
  • Si l'anticorps ne semble pas reconnaitre votre cible, il peut être utile de s'assurer que la protéine cible est bien exprimée dans le tissu ou la variété de cellule que vous étudiez. Antibodies-online accepte la preuve expérimentale au niveau protéomique, ainsi que la preuve canonique (par exemple. une référence dans une revue évaluée par des pairs).
  • L’intensité du signal dans un test western blot dépend fortement de la concentration de l'antigène dans l'échantillon testé, et peut varier de manière significative en fonction des anticorps primaire et secondaire utilisés. Il peut être nécessaire de répéter la même expérience avec différentes dilutions d’anticorps primaire/secondaire afin d'arriver au résultat escompté.
  • IHC/IF

  • Beaucoup d'anticorps ne sont approuvés et testés que sur des sections de tissu qui ont été conservées selon une méthode spécifique. Par exemple, les anticorps marqués IHC(p) ou SI(p) sont approuvés seulement pour l'usage sur des sections de tissu FFIP (fixés au formol et inclus dans la paraffine) après extraction d'antigène. Bien que cela n'exclut certainement pas la possibilité de fonctionnement dans des applications non-approuvées, antibodies-online ne peut élargir la garantie à une application qui n'a pas été spécifiquement approuvée par le fabricant.
  • En effectuant un test IHC/IF sur des sections de tissu FFIP, l'extraction d'antigène peut être nécessaire pour déceler un epitope identifié par quelques anticorps. Si vous avez besoin d'un protocole spécifique pour l'extraction d'antigène, veuillez contacter l'un de nos scientifiques pour assistance technique.
  • Il est nécessaire de bloquer votre échantillon pour éviter une liaison non spécifique et un signal de fond excessif. Antibodies-online recommande l'utilisation d'une solution contenant 5% de lait en poudre écrémé et 2-3% BSA, ou des tampons de blocage communément disponibles homologués pour des applications IHC/IF.
  • Antibodies-online accepte la preuve expérimentale au niveau protéomique, ainsi que la preuve canonique (par exemple, une référence dans une revue évaluée par des pairs).
  • L’intensité du signal dans un test IHC ou IF dépend fortement de la concentration de l'antigène dans l'échantillon testé, et peut varier de manière significative en fonction des anticorps primaire et secondaire utilisés. Il peut être nécessaire de répéter la même expérience avec différentes dilutions d’anticorps primaire/secondaire afin d'arriver au résultat escompté.
  • Cytométrie de flux/FACS

  • Les contrôles isotypiques sont toujours vivement recommandés lors de l'analyse par Cytométrie de flux/FACS. Un contrôle isotypique bien adapté aide à déterminer le bruit de fond, et permet à l'utilisateur de différencier entre le signal et le bruit. Si vous avez besoin d'aide pour choisir le contrôle isotypique approprié, veuillez contacter l'un de nos scientifiques chargés de l'assistance technique.
  • La perméabilisation de la membrane des antigènes cytosoliques et des autres antigènes intracellulaires est nécessaire avant l'analyse par FACS. Les réactifs de perméabilisation et les protocoles dépendent du type de cellule et du type de membrane qui doit être perméabilisée. Si vous avez besoin d'aide concernant votre protocole spécifique de perméabilisation, veuillez contacter l'un de nos scientifiques chargés de l'assistance technique.
  • Le succès des analyses par cytométrie de flux/FACS dépend fortement de la densité des cellules utilisées. La densité cellulaire optimale varie selon le type de cellule, de l'antigène dosé et de la méthode d'analyse. Il peut être nécessaire d'essayer différentes densités cellulaires afin d'obtenir le résultat escompté.
  • Protéines recombinantes

  • Il est important de noter que, même si tout est mis en œuvre pour préserver la structure et la fonction endogènes des protéines recombinantes durant leur production, elles peuvent ne pas partager les mêmes propriétés avec leurs homologues natives. Les différences dans le pliage de protéine et les modifications post-traductionnelles peuvent avoir pour effet une protéine recombinante qui possède des propriétés différentes de celles de son homologue native. Ces différences peuvent affecter la fonction et (dans certains cas) la capacité d'un anticorps à reconnaitre la protéine en question. Sauf indication contraire sur la fiche de produit ou confirmé par notre équipe d'assistance technique, antibodies-online ne peut garantir l'activité fonctionnelle de toute protéine recombinante, ni la compatibilité d'un anticorps avec la protéine recombinante correspondante.
  • Si vous avez besoin de précisions, si vous recherchez des contrôles appropriés, ou si vous souhaitez connaître les lignes directrices de base pour tout autre type d'expérience, merci de nous contacter. Nous serions très heureux de vous aider à planifier votre prochaine expérience.

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