FACS Antibodies

Le tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) est un type spécialisé de cytométrie en flux. Il trie un mélange hétérogène de cellules biologiques dans deux conteneurs ou plus, une cellule à la fois, en se basant sur les caractéristiques spécifiques de diffusion de la lumière et de fluorescence de chaque cellule et des anticorps qui lui sont attachés.

Comment choisir un anticorps pour une expérience FACS ?

Suivez ce guide pour obtenir des résultats précis en cytométrie en flux. Dans une expérience de cytométrie en flux, les anticorps jouent un rôle crucial. Les anticorps conjugués à des marqueurs fluorescents sont capables d'identifier nos cellules d'intérêt spécifiques et de quantifier la quantité de notre cible sur la cellule.

Il existe plusieurs méthodes de production d'anticorps, chacune ayant ses avantages et ses inconvénients. Les anticorps diffèrent par leur qualité de liaison et, en fin de compte, par la coloration des cellules. Les anticorps polyclonaux sont plus susceptibles d'avoir une réaction croisée avec des protéines autres que la cible et sont susceptibles de varier d'un lot à l'autre. Les anticorps monoclonaux, en particulier les recombinants, sont cohérents et reproductibles. Plus précisément, les anticorps monoclonaux se lient au même épitope, ce qui les rend idéaux pour les expériences de cytométrie de flux. Ils réduisent le risque de liaison hors cible et offrent la meilleure reproductibilité possible d'un lot à l'autre.

Les anticorps recombinants constituent également une alternative sérieuse. Comme ils sont issus du génie génétique, il est possible de modifier la partie Fc de l'anticorps, réduisant ou même éliminant la liaison aux récepteurs Fc des cellules cibles. Attention, toutes les cibles souhaitées ne sont pas actuellement couvertes par les anticorps recombinants.

Lorsque nous réduisons notre pool d'anticorps possibles aux monoclonaux, nous devons encore faire la distinction entre les différentes lignées de clones. Toutes ne sont pas adaptées à la cytométrie en flux et certaines peuvent même reconnaître le mauvais épitope, par exemple un produit ciblant un épitope intracellulaire alors que l'intention est d'éviter de perméabiliser les cellule

Une dernière question qui se pose est de savoir s'il faut utiliser un anticorps directement conjugué ou non conjugué. Les anticorps directement conjugués simplifient le protocole de dosage, en réduisant le risque d'erreurs lors de la préparation des échantillons. En particulier pour les approches de multiplexage, ils constituent le format le plus approprié - permettant l'utilisation simultanée de plusieurs anticorps produits dans la même espèce et permettant une complexité expérimentale accrue. Si la combinaison anticorps-fluorophore souhaitée n'est pas disponible, des anticorps primaires combinés à des anticorps secondaires conjugués peuvent être utilisés en remplacement.

Additional Reading

Fluorescent Conjugated Antibodies for FACS

Fluophore	Excitation Peak (nm)	Emission Peak (nm)	Emission Color
DyLight 405	400	421
Alexa Fluor 405	401	421
DyLight 350	352	435
Alexa Fluor 350	346	442
Atto 390	390	470
Alexa Fluor 488	493	519
FITC	492	520
Atto 488	501	523
Cy3	550	570
Alexa Fluor 594	550	570
Phycoerythrin (PE)	565	578
Atto 565	563	592
Atto 594	591	616
Atto 633	629	657
APC	650	661
Alexa Fluor 647	651	667
Cy5	650	670
PerCp	490	675
Atto 655	633	684
Cy5.5	675	694
Atto 680	684	702
Alexa Fluor 700	702	723
Cy7	778	754
DyLight 800	771	796
Alexa Fluor 790	784	814

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