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Antibody Arrays

Rédigé/ Édité par Julian Pampel, BSc

Les arrays d’anticorps permettent l’analyse multiplex de protéines en détectant en parallèle de nombreux biomarqueurs apparentés à partir d’un seul échantillon. Au lieu de mesurer un analyte à la fois, les chercheurs peuvent utiliser des arrays d’anticorps pour profiler les cytokines, les chimiokines, les facteurs de croissance et d’autres protéines associées à des voies biologiques au cours d’une seule expérience.

Cet article présente le principe, le workflow et les applications des arrays d’anticorps. Il se concentre sur les arrays d’anticorps RayBio disponibles chez antibodies-online, que nous proposons dans le cadre de notre partenariat avec RayBiotech. L’aperçu structuré des produits facilite la comparaison des domaines de recherche, de la réactivité selon l’espèce, des méthodes de détection, des exigences relatives aux échantillons et des panels de cibles lors de la sélection d’un array pour l’analyse multiplex de protéines.

Que sont les arrays d’anticorps ?

Les arrays d’anticorps sont des immunoessais multiplex permettant de détecter plusieurs protéines en parallèle dans un même échantillon biologique. Dans un array d’anticorps, des anticorps de capture sont immobilisés à des positions définies sur une membrane, une lame de verre ou une surface d’array multi-puits. Lorsqu’un échantillon est appliqué, les protéines cibles se lient aux anticorps correspondants et sont détectées à l’aide de systèmes de lecture chimiluminescents, fluorescents ou colorimétriques.

Comme de nombreux analytes peuvent être mesurés simultanément, les arrays d’anticorps sont particulièrement utiles pour le profilage protéique ciblé sur des voies biologiques, le criblage de biomarqueurs et la comparaison des profils d’expression protéique entre différents groupes d’échantillons. Ils sont fréquemment utilisés pour étudier les cytokines, les chimiokines, les facteurs de croissance, les marqueurs de l’angiogenèse, les protéines de la réponse immunitaire, les cibles de phosphorylation et les panels de biomarqueurs associés à des maladies avant de valider individuellement les cibles à l’aide d’essais mono-analytes tels que l’ELISA.

Focus : RayBio Human Cytokine Array C5

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Human Cytokine Array C5 (ABIN625562) est un array membranaire RayBio C-Series destiné au profilage semi-quantitatif des cytokines humaines, des chimiokines, des facteurs de croissance et des médiateurs associés à la réponse immunitaire à partir d’échantillons biologiques liquides.

Dans « Unveiling the origin and functions of diagnostic circulating microRNAs in lung cancer », Colangelo et al. ont étudié l’origine d’une signature diagnostique composée de 13 miARN circulants pour le cancer du poumon et ont cherché à déterminer si certains miARN contribuent fonctionnellement aux phénotypes tumoraux et immunitaires. Les auteurs ont analysé des lignées cellulaires de cancer du poumon et des lignées hématopoïétiques ainsi que des profils sériques provenant de 975 personnes à haut risque, puis se sont concentrés sur miR-29a-3p et miR-223-3p. Dans la partie fonctionnelle de l’étude, un profilage par array de cytokines a été utilisé afin d’évaluer l’effet de miR-223-3p sur la signalisation inflammatoire. L’array a permis d’établir un lien entre la modulation de miR-223-3p et une modification de l’expression des cytokines, étayant la conclusion selon laquelle ce miARN circulant constitue non seulement un biomarqueur potentiel, mais pourrait également contribuer à la pathogenèse du cancer du poumon et à la modulation immunitaire. [PMID]

Réactivité :
Humain
Détection :
Chimiluminescent
Nombre de cibles :
80
Format :
Membrane
Résultat :
Semi-quantitatif
Volume d’échantillon :
1 mL

Le panel de cibles comprend des cytokines et chimiokines inflammatoires telles que IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ, TNF-α, les protéines MCP, les protéines MIP, RANTES et IP-10, ainsi que plusieurs facteurs de croissance, notamment VEGF-A, EGF, HGF, des membres de la famille FGF et les isoformes de TGF-β.

Human Cytokine Array C5 625562
Répartition des cibles du Human Cytokine Array C5.

Fonctionnement des arrays d’anticorps

workflow des arrays d’anticorps antibodies-online 1 Support de l’array (membrane ou lame de verre) 2 Incubation avec Échantillon 3 Lavage rigoureux Lecture ARRAY MEMBRANAIRE LAME DE VERRE 5 4 Incubation avec Anticorps conjugué workflow des arrays d’anticorps antibodies-online antibodies-online gmbH antibodies-online https://www.antibodies-online.com/resources/43/1431/antibody-arrays/ français Julian Pampel 23.06.26 jp arrays d’anticorps Les arrays d’anticorps sont des immunoessais multiplex permettant de détecter plusieurs protéines en parallèle dans un même échantillon biologique. Dans un array d’anticorps, des anticorps de capture sont immobilisés à des positions définies sur une membrane, une lame de verre ou une surface d’array multi-puits. Lorsqu’un échantillon est appliqué, les protéines cibles se lient aux anticorps correspondants et sont détectées à l’aide de systèmes de lecture chimiluminescents, fluorescents ou colorimétriques.
Workflow d’un array d’anticorps : 1. Préparation de l’array et de l’échantillon. 2. Incubation avec l’échantillon. 3. Lavage. 4. Incubation avec l’anticorps de détection. 5. Lecture

Les arrays sont disponibles sous différents formats, notamment des arrays sur membrane, des arrays sur lame de verre, des arrays ELISA multiplex quantitatifs et des arrays de profilage basés sur le marquage. Bien que les détails de l’essai varient selon la famille de produits, le workflow général repose sur le même principe : plusieurs spots de capture ou régions de liaison sont disposés sur une surface d’array, ce qui permet d’évaluer en parallèle de nombreuses cibles à partir du même échantillon.

  1. Préparation de l’array et de l’échantillon : L’échantillon est préparé conformément au protocole du produit puis appliqué sur la surface de l’array. Selon le type d’array, les protéines cibles peuvent se lier directement aux anticorps de capture immobilisés, ou les protéines de l’échantillon peuvent d’abord être marquées avant l’incubation.
  2. Incubation et liaison des cibles : Les protéines ou autres molécules cibles présentes dans l’échantillon interagissent avec les spots de capture correspondants sur l’array membranaire ou sur lame de verre. Chaque spot correspond à un analyte, un anticorps ou un réactif de liaison défini.
  3. Lavage : Les composants de l’échantillon qui ne sont pas liés sont éliminés par lavage. Cela réduit le signal de fond et améliore la spécificité de la lecture.
  4. Détection : Les cibles liées sont visualisées à l’aide de la chimie de détection spécifiée pour le format de l’array. Il peut s’agir d’une détection chimiluminescente, d’une détection fluorescente, de systèmes biotine-streptavidine, d’anticorps de détection marqués ou d’une détection directe de l’échantillon basée sur le marquage.
  5. Lecture et analyse du signal : L’intensité du signal de chaque spot est mesurée à l’aide du système d’imagerie approprié. Les arrays membranaires chimiluminescents sont couramment utilisés pour comparer l’expression relative des protéines, tandis que les arrays fluorescents sur lame de verre et les arrays Quantibody permettent une lecture à plus haut débit. Les arrays quantitatifs utilisent des standards afin de calculer les concentrations des analytes ; les arrays semi-quantitatifs servent généralement à comparer les intensités relatives des signaux ou les variations d’expression entre les échantillons.

Comme le workflow dépend du format d’array sélectionné, les chercheurs doivent consulter le protocole du produit concerné afin de vérifier le volume d’échantillon, les types d’échantillons compatibles, les conditions d’incubation, la méthode de détection, les exigences d’imagerie et si l’essai fournit des données quantitatives ou semi-quantitatives.

Comment choisir un array d’anticorps

Le choix de l’array d’anticorps dépend de la question biologique, du matériel d’échantillon disponible et du type de données recherché. Avant de sélectionner un produit, les chercheurs doivent déterminer si l’expérience vise un criblage large, une comparaison ciblée sur une voie biologique ou une mesure quantitative de protéines sélectionnées.

  1. Commencez par le domaine de recherche : Choisissez un array correspondant à la voie biologique ou au contexte pathologique de l’expérience, par exemple les cytokines, les chimiokines, l’angiogenèse, l’apoptose, l’inflammation, la phosphorylation, le cancer ou la signalisation des récepteurs.
  2. Vérifiez la réactivité selon l’espèce : Sélectionnez un array validé pour l’espèce correspondant à l’échantillon. De nombreux arrays sont conçus pour des échantillons humains ou murins, mais la réactivité doit toujours être confirmée sur la page du produit concerné.
  3. Adaptez l’array au type et au volume d’échantillon : Les arrays d’anticorps peuvent être utilisés avec différents types d’échantillons biologiques selon le format du produit. Vérifiez si l’array est adapté au sérum, au plasma, au surnageant de culture cellulaire, au lysat cellulaire, au lysat tissulaire ou à d’autres matrices d’échantillons, et confirmez le volume requis avant de commander.
  4. Choisissez entre des données quantitatives et semi-quantitatives : Les arrays quantitatifs sont utilisés lorsqu’il est nécessaire de déterminer les concentrations des analytes et comprennent généralement des standards pour l’étalonnage. Les arrays semi-quantitatifs conviennent davantage à la comparaison des intensités relatives des signaux, des profils d’expression ou des variations entre groupes expérimentaux.
  5. Tenez compte de la méthode de détection et de l’équipement disponible : Certains arrays utilisent une détection chimiluminescente, tandis que d’autres reposent sur une lecture fluorescente. Le format sélectionné doit être compatible avec le système d’imagerie disponible au laboratoire, par exemple un imageur de chimiluminescence ou un scanner laser pour lames.

Les arrays RayBio sont disponibles dans plusieurs familles de produits. Les arrays Quantibody et Q-Series sont conçus pour des mesures multiplex quantitatives à l’aide de standards, tandis que de nombreux arrays C-Series, G-Series, GS-Series et L-Series sont utilisés pour le criblage semi-quantitatif ou la comparaison relative des profils d’expression protéique. L’aperçu des différentes séries ci-dessous permet de distinguer les principaux formats avant de sélectionner un produit particulier.

Type d’array Objectif Caractéristique principale
Arrays C-Series Criblage ciblé sur des voies biologiques et comparaison relative de l’expression protéique. Arrays sur membrane avec détection chimiluminescente ; adaptés à la comparaison des profils de signal entre groupes d’échantillons.
Arrays G-Series / GS Profilage multiplex de protéines avec lecture fluorescente. Format sur lame de verre ; utile lorsqu’un scanner de fluorescence est disponible et que plusieurs échantillons ou cibles doivent être profilés en parallèle.
Arrays Quantibody / Q-Series Mesure multiplex quantitative de protéines sélectionnées. Utilise des standards pour calculer les concentrations des analytes ; adapté lorsque des valeurs de concentration sont nécessaires plutôt qu’un simple signal relatif.
Arrays L-Series Profilage large de protéines d’échantillons marquées ou de classes de cibles spécialisées. Workflow basé sur le marquage ; utile pour le profilage exploratoire et des applications telles que l’analyse de la glycosylation.

Pour les études exploratoires, un array plus large ciblé sur une voie biologique peut aider à identifier des biomarqueurs candidats pour des analyses ultérieures. Pour les études axées sur la validation, un array quantitatif ciblé ou des essais ELISA individuels peuvent être plus appropriés. Le tableau de produits ci-dessous permet de comparer tous les arrays selon le domaine de recherche, l’ABIN, la réactivité, la méthode de détection, le volume d’échantillon et le nombre de cibles.

Arrays d’anticorps RayBio disponibles chez antibodies-online

Domaine de recherche ABIN Nom Réactivité Méthode de détection Volume d’échantillon Nombre de cibles

Arrays d’anticorps personnalisés et assistance

Les arrays d’anticorps du catalogue constituent souvent l’option la plus rapide lorsque le domaine de recherche et le panel de cibles requis sont déjà disponibles. Pour les projets nécessitant une combinaison différente de marqueurs, un panel de validation plus restreint, un panel de découverte plus large ou un ensemble de cibles non couvert par un produit standard, un array d’anticorps personnalisé peut être envisagé.

Dans le cadre de notre coopération avec RayBiotech, nous pouvons accompagner les demandes d’arrays personnalisés pour les chercheurs ayant besoin d’un format d’essai multiplex adapté à leur projet. Les projets personnalisés peuvent être utiles lorsqu’une étude nécessite une signature de biomarqueurs définie, un panel spécifique à une espèce, une combinaison de cibles axée sur une maladie ou une configuration d’array adaptée au matériel d’échantillon disponible et aux exigences de lecture.

Quand un array personnalisé peut être utile

  • La combinaison de cibles souhaitée n’est pas disponible sous forme d’array du catalogue.
  • Le projet nécessite un panel ciblé pour une voie biologique, un modèle de maladie ou une signature de biomarqueurs spécifique.
  • Un panel de criblage plus large doit être adapté à des cibles sélectionnées pour des études de suivi.
  • Le format de l’essai doit être adapté au volume d’échantillon, à l’espèce, à la méthode de détection ou à l’équipement d’imagerie disponible.

Comment nous pouvons vous aider

  • Examiner la liste des cibles et l’application prévue.
  • Clarifier l’espèce, le type d’échantillon, le volume d’échantillon et le type de données requis.
  • Déterminer si un array du catalogue, un panel modifié ou un array personnalisé constitue l’option la plus adaptée.
  • Coordonner la demande et le processus de devis pour les options d’arrays personnalisés RayBiotech appropriées.

Demander un array d’anticorps personnalisé

Pour évaluer un projet personnalisé, veuillez fournir la liste des cibles, l’espèce, le type d’échantillon, le nombre approximatif d’échantillons, la méthode de détection souhaitée et préciser si l’étude nécessite des concentrations quantitatives ou une comparaison relative des signaux. Notre équipe de support scientifique peut vous aider à évaluer la faisabilité du projet et à identifier l’étape suivante la plus appropriée.

Contactez-nous : support@antibodies-online.com


Références

  1. Wolter, Niessner, Seidel: "Detection of Escherichia coli O157:H7, Salmonella typhimurium, and Legionella pneumophila in water using a flow-through chemiluminescence microarray readout system." dans: Analytical chemistry, Vol. 80, Issue 15, pp. 5854-63, (2008) (PubMed).
  2. Fenton, Nuñez, Yakar, Perkins, Hord, Hursting: "Diet-induced adiposity alters the serum profile of inflammation in C57BL/6N mice as measured by antibody array." dans: Diabetes, obesity & metabolism, Vol. 11, Issue 4, pp. 343-54, (2010) (PubMed).
  3. Kim, Kim, Iijima, Kobayashi, Kita: "Protein microarray analysis in patients with asthma: elevation of the chemokine PARC/CCL18 in sputum." dans: Chest, Vol. 135, Issue 2, pp. 295-302, (2009) (PubMed).
  4. Jørgensen, Bæk, Varming: "Potentials and capabilities of the Extracellular Vesicle (EV) Array." dans: Journal of extracellular vesicles, Vol. 4, pp. 26048, (2015) (PubMed).
  5. Mikami, Matsuzaki, Horie, Noguchi, Jo, Narumoto, Kohyama, Takizawa, Nagase, Yamauchi: "Lymphotoxin ? receptor signaling induces IL-8 production in human bronchial epithelial cells." dans: PLoS ONE, Vol. 9, Issue 12, pp. e114791, (2014) (PubMed).
  6. O, Waelkens, Vanhie, Peterse, Fassbender, D'Hooghe: "The Use of Antibody Arrays in the Discovery of New Plasma Biomarkers for Endometriosis." dans: Reproductive sciences (Thousand Oaks, Calif.), Vol. 27, Issue 2, pp. 751-762, (2020) (PubMed).
  7. Wang, Chi, Zeng, Xu, Li, Wang, Qu: "Discovery of crucial cytokines associated with deep vein thrombus formation by protein array analysis." dans: BMC cardiovascular disorders, Vol. 24, Issue 1, pp. 374, (2024) (PubMed).
  8. Colangelo, Mazzarelli, Cuttano, Dama, Melocchi, Afanga, Perrone, Graziano, Bianchi: "Unveiling the origin and functions of diagnostic circulating microRNAs in lung cancer." dans: British journal of cancer, Vol. 132, Issue 10, pp. 947-956, (2025) (PubMed).
Julian Pampel
Julian Pampel, BSc
Content Manager at antibodies-online.com

Creative mind of antibodies-online with a keen eye for details. Proficient in the field of life-science with a passion for plant biotechnology and clinical study design. Responsible for illustrated and written content at antibodies-online as well as supervision of the antibodies-online scholarship program.

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